這是比薩多翼式祭壇畫中的第二幅畫作，現已解體並遺失。此畫作位於《王座上的聖母聖子和四天使》的上方，構成了祭壇畫上部的中心。在金黃色的背景上，馬薩其奧畫出了受難的耶穌，頭頸直垂至胸部，兩臂橫展在十字架上；兩邊分別是穿藍色長袍、隻手絕望地絞在一起的聖母馬利亞，和頭靠在緊握的雙手上、悲愴欲絕的聖約翰；在耶穌的腳下，則是抹大拉的馬利亞張開雙臂、舉向受難耶穌的絕望形象。

　耶穌降臨凡界，為凡人而死，這是一部充滿人本主義色彩的劇情。畫面，環繞畫中人物頭部的圓圈刻畫入微；抹大拉的馬利亞滿頭金黃色的頭髮遮住了頸子；聖母馬利亞只露出側面的表情；耶穌的臉朝正面；約翰的面部呈四分之三微斜。人物的痛苦表情各異，相信觀眾可以從中感受到，這四個人物的悲痛。

　此畫作是已佚失的比薩多翼式祭壇畫中的一部份，當它還完好地保存在聖母馬利亞教堂的時候，瓦薩利會對此畫做了詳細的描述：「畫面上是一位抱著聖嬰的聖母，和四位在她腳下正在演奏及歌唱的小天使，其中一個天使，一面彈奏著琴，一面豎起耳朵傾聽聲音是否和諧。」當瓦廷利提到這幅畫時，他寫道：「他們將聖母置於聖彼得、施洗者聖約翰、聖朱利亞諾和聖尼古拉之中，所有人物的形象都栩栩如生。」

　聖座上的聖母是比薩多翼式祭壇畫中寓意和象徵的中心。由於聖母的形象尺寸被放大，使聖母在畫中顯得超乎尋常的重要。馬薩其奧選擇了一個低角度的視覺焦點，以突出童貞女無可取代的歷史意義，聖母全身包裹在有柔軟皺褶的鮮藍色長袍下，臉龐略向聖嬰傾斜，但目光超越觀賞者投向遠方，表情溫柔而憂鬱；雙手並沒有緊抱著聖嬰；聖母左手扶持聖嬰，右手拿著一串葡萄給聖嬰吃，而耶穌將葡萄放到嘴邊，手勢極其自然。

　瓦薩利評馬薩其奧：「與其他繪畫大師相比，他更注重描繪人物的姿態舉止；在他以前的其他大師，對此描繪得並不多……就像在這幅畫中，馬薩其奧表現出自下而上觀察人體的才華，的確使人雀躍不已；直至今天，人們在聖保羅的腳上，仍可看到他這種化繁為簡的技法；以前那個傳統的、奇特的老方法，使畫中人物彷彿是用腳尖行走。這個老傳統一直沿續到他那個時代，卻無人加以糾正，他是第一位改變此種畫法的人，而且這個改變的影響流傳至今……。他在繪畫中加入了鮮豔的色彩，以及讓人驚喜的架構，正使人物處於極顯要的突出地位；這所有的一切皆向世人證實，他是自喬托以來所有繪畫巨匠中，最具時代意義的一位……。」

　其次是那「鮮艷的顏色」，這些鮮艷的顏色似乎是在 1771 年的一場火災中，因煙燻而黯淡失色，但在 1989 年竣工修復後，又重現了昔日的光澤。他那使人驚奇的描繪能力，深切的刻劃了人們內心與外在的特性，以及從相貌到內心的活動，即使像聖保羅那種「複雜」的性格，也都能在他的筆下神奇地呈現出來。最難得的是馬薩其奧描繪軀體的細節部份，例如在表現人物舉止的動態空間時，他擅長運用明暗度與透視手法，來實現肌肉的圓弧感和重量感，這種技法正如瓦薩利所描述的，是與喬托的經驗一脈相承。

　馬薩其奧這位文藝復興運動的創新者，在這幅畫中表現出實質的空間世界，和當時裝飾畫的風格、目的背道而馳，並完全投入在二度空間的立體畫面。他忠於布魯內萊斯基的教誨，理性地構築了統一的空間，使其有力地刻劃出，在相同空間內活動的各種人物與事件。

　在馬薩其奧的這幅畫中，亞當和夏娃在一股耀眼光線的照射下，沈重的身影投射在地上，臉上流露著遭受聖父譴責的沈重心情。亞當將雙手捂住臉龐，絕望的表情多麼地扣人心弦，夏娃則盡力地遮掩著自己赤露的身軀，人們還似乎可聽到她的哭喊聲。馬薩其奧的壁畫是繪畫史上表現人物重量的先例之一，更是邁向文藝復興「寫實主義」的先驅者之一。